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中东娱乐电子在线:新型冠状病毒核酸实验室假阳性结果增多的分析处理

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日期:2020-12-31 15:23:58 来源: 检验医学微信公众号 点击:


作者 | 黄日昇 陈文雄  邓家庆

单位 | 北海市中医医院医学检验科




前  言


新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种新型β属冠状病毒,属于单链RNA病毒,是引起新型冠状病毒肺炎(COVID-19)主要病原微生物[1]


实时荧光RT-PCR作为SARS-CoV-2确诊病例的诊断标准之一,是疫情其中主要的实验室检测手段[2-3],在疫情防控中起到非常重要的作用,但同时也暴露了众多新冠冠状病毒核酸实验室的短板与不足。


本案例旨在通过新型冠状病毒核酸实验室假阳性增多的分析处理,为病原微生物安全防护提供建设性意见。



案例经过及分析


根据SARS-CoV-2检测实验室工作人员反映,2020年6月20日至2020年6月23日期间SARS-CoV-2核酸检测假阳性结果增多,主要表现形式为:阴性对照样品出现扩增曲线(图1-2);假阳性样品突发式增多伴随阳性孔位不确定性(图3-4)。


图28:要求实验室结束后将扩增八联管装密封袋处理。预防扩增产物泄露污染


5  增加对SARS-CoV-2核酸检测实验室铺料质检


铺料质检是SARS-CoV-2核酸检测质量控制中我们往往忽视的环节,本次实验室扩增生物的污染最根本的原因是我们对试验辅料质检的不重视,未能及时发现PCR管的质量问题,从而导致实验室污染。


核酸检测实验室的辅料指的是核酸常用的一些辅助试剂和耗材,例如采样管、拭子、离心管、PCR管、吸头、移液器、无核酸酶水和试管架等。铺料质检一般包括外包装检查、内包装检查、性能质检、污染物质检、抑制物质检等。


下面以本次案例中的PCR管(八联管)为例,介绍一下常见的铺料质检。


①渗漏密闭性:将n个PCR管(八联管)加入半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。


②离心密闭性:将n个PCR管(八联管)加入半量纯水,放入离心机,1000rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。


③热密闭性:将n个PCR管(八联管)加入半量纯水,盖好盖子称重后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,再进行称重,PCR管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。


④冷密闭性:将n个PCR管(八联管)加入半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。


⑤污染物质检:将n个PCR管(八联管)加入半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1min后静置5min,作为模板进行扩增,RT-PCR无扩增为合格。


⑥抑制物质检:将n个PCR管(八联管)分别加入弱阳性质控物,室温静置5min,然后进行提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板进行扩增,RT-PCR扩增未被抑制为合格。


⑦空白荧光通透性:对于RT-PCR,需要考察PCR管是否有非特异性荧光信号,将n个空PCR管,盖好盖子后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,RT-PCR无扩增为合格。


⑧阳性荧光通透性:对于RT-PCR,还需要考察PCR管是否会抑制荧光的通透性,将n个含弱阳性样品和扩增试剂的PCR管,与确认无荧光干扰的PCR管,盖好盖子后放入PCR仪一同扩增,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,RT-PCR扩增未被抑制为合格。



总  结


本次实验室SARS-CoV-2核酸检测实验室扩增及产物分析一区产物污染,采取了有效的环境监测检测手段及污染源清除方法,迅速有效启动了应急预案。


从发现到清除污染源仅用了10天,完成了一次生物安全防护的大考核,但同时也暴露了实验室SARS-CoV-2核酸检测实验室预防扩增产物污染意识淡薄,PCR管或八联管使用不规范,实验室铺料无质检等问题。


因此建立完善的实验室质量管理体系及实验室铺料质检制度(措施)、培养实验室技术人员应急处理能力和生物安全意识极其重要。



专家点评

COVID-19为当下新发疫情,SARS-CoV-2核酸检测也是应对疫情有效诊断标准,生物安全防护和预防实验室污染极其重要,笔者通过该案例阐述了核酸实验室环境监测检测、应急预案、完善的实验室质量管理体系的重要性,建议对SARS-CoV-2核酸检测实验室铺料质检是一大亮点,值得推广。

点评专家介绍

李轶春,副主任技师,从事临床微生物检验26年,现任北海市中医医院检验科主任,中国中西医结合学会检验医学专业委员会分子诊断学术委员会委员,广西医师协会第一届检验医师分会中青年委员会常务委员,广西抗癌协会常务委员,广西医学会微生物学与免疫学第五届委员会常务委员等职务


【参考文献】

[1]LIQ,GUANX,WUP,etal.Early Transmission Dynamics in Wuhan,China,of novel coronavirus-infected pneumonia[J/OL].NEJM,(2020-01-29)[2020-02-24].http://0fn.3366160.com/90/doi/full/10.1056/NEJMoa2001316.

[2]国家卫生健康委办公厅,国家中医药管理局办公室.新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第版)[EB/OL].(2020-03-04)[2020-04-20].http://0fn.3366160.com/yzygj/s7653p/202003/46c9294a7dfe4cef80dc7f5912eb1989.shtml.

[3]胡孝林,张亮亮,罗阳.新型冠状病毒肺炎实验室检测策略[J/OL].中华医院感染学杂志1-8[2020-07-23].httpkns.cnki.netkcmsdetail11.3456.R.20200430.1559.004.html.

[4]毕承恩,瞿文金,郑丽娟,等.核酸实验室污染原因及处理[J].临床血液学杂志(输血与检验),2017,30(01)135-137.

[5]薛秀荣,来祝檩,韩惠云.浅谈核酸检测实验室防污染措施[J].中国卫生产业,2018,15,(26)144-145.



END







(责任编辑:xsq)

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